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        flag抗體A01868如何進行鑒定,有哪些方法

        點擊次數:215發布時間:2021-11-22
          flag抗體A01868是一段親水性八氨基酸短肽,其分子質量約為1.0KDa??贵w可以通過基因重組技術添加到蛋白質的N端或C端,由于flag抗體的尺寸小,親水性強,不會對蛋白表達、蛋白水解成熟、抗原性等造成影響。
          
          flag抗體A01868的鑒定:
          
          由蛋白濃度的測定公式求得蛋白濃度:A280nm×1.45-A260nm×0.74=蛋白濃度(mg/mL);單抗純化后,根據純化前后體積,推算出腹水中蛋白含量。
          
          單抗相對親和力測定:
          
          以合成的包被原400ng/孔包被酶標板,按行分別加入按一定濃度倍比稀釋的純化單抗,37℃溫育30min,洗滌;加入酶標二抗,37℃溫育30min,洗滌;加底物顯色20min,加終止液終止反應,雙波長掃描測定吸光值。
          
          以單抗濃度為橫坐標,以所對應的OD值為縱坐標作圖,根據反應曲線分析單克隆抗體的相對親和力。
          
          以抗體濃度的對數值為橫坐標,以所對應的OD值為縱坐標作圖,得一曲線,取曲線上OD值的50%所對應的橫坐標為該抗體的稀釋度,算出該抗體總的稀釋度后,計算親和常數。親和常數計算公式:親和常數K=160000(抗體分子量)/抗體稀釋度×抗體濃度(mg/ml)
          
          flag抗體A01868能夠特異性的與標簽蛋白上的flag標簽結合,能夠用于標簽蛋白的純化、定性定量檢測蛋白表達水平、細胞內定位等實驗。
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