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        新手必看:如何自己手動填裝鎳Ni柱

        點擊次數:106發布時間:2022-02-21
          鎳Ni柱具有很高的穩定性和兼容性,兼容還原性試劑、變性劑、洗滌劑、以及其它添加物。適用于純化可溶性蛋白和包涵體蛋白。為了讓大家更多的了解Ni柱,這里給大家簡單介紹一下如何根據實際需求自己填裝Ni層析柱。
          
          操作方法:
          
          1、輕輕將鎳Ni柱懸浮在水中,沉降后沉積物體積要達到35ml。自然沉降,不要用磁力攪拌器以免打碎微球。
          
          2、將Ni樹脂轉移到砂芯漏斗中,用50ml純水洗滌四次,除去儲存液中的乙醇等物質,以純水保存至50ml總體積。
          
          3、用純水清洗空色譜柱,然后關閉出口閥門,保留1cm高的液面。
          
          4、通過玻璃三角漏斗將步驟2的樹脂泥漿倒入色譜柱中,用純水將柱子填滿。
          
          5、在柱子頂端安上接頭并將之與泵連接,以一定的流速13ml/min(或400cm/h)。不要超過規定的樹脂或柱子的使用壓力。
          
          6、保持流速,體積穩定后再流3倍柱體積。標記柱床高度。
          
          7、關閉流速,關掉鎳Ni柱的出口。斷開頂端接頭與泵,將頂端接頭移至標記處,固定接頭。
          
          8、用1倍柱體積的0.1M硫酸鎳以5ml/min流經柱子。
          
          9、用10倍柱體積的水以10ml/min洗掉未結合的Ni離子。
          
          10、如果柱子不馬上使用,用20%乙醇以10ml/min的流速洗滌四倍柱體積后保存。
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